檢測認證人脈交流通訊錄
- 1.名稱：TMB底物液，單組份底物液，ELISA 底物顯色液。
2. 產品描述：
用于HRP標記的ELISA；單一組分，穩定，使用方便，靈敏度高。主要成分是3,3’,5,5’–四甲基聯苯胺[3,3’,5,5’- tetramethylbenzidine(TMB)],是辣根過氧化物酶（HRP）的底物，在辣根過氧化物酶的作用下，發生氧化劑反應生成藍色產物。顏色的強弱與HRP的活性呈正比，從而可以用于基于HRP標記物的檢測。
規格： 10mL, 1000mL, 5000mL
3.保存及運輸：
常溫運輸(勿超過30℃)，2-8℃儲存12個月。
4.使用方法：
根據計劃使用的數量，將該次需要的TMB顯色液從大瓶轉移的干凈的避光小瓶中。后續從小瓶中取用
1)加液：加完HRP結合物并溫育一定時間后，洗板3-5次，每孔加TMB顯色液100μL - 200μL。
2)根據個人實驗需要，在室溫（15-25℃）或37°C下溫育10-30分鐘。
3)終止：加50微升的2M鹽酸或硫酸溶液終止反應，孔中反應液由藍色變為黃色。
4)讀數：終止反應后30分鐘內在450nm處讀數。
如果出現高的反應背景或沉淀，表明TMB底物反應過于強烈。為了避免產生沉淀，可在終止后馬上讀數；或者進一步稀釋一抗和/或HRP結合物
5.注意事項:
1)適用于HRP標記的ELISA實驗，該底物中含TMB和過氧化氫，在HRP的作用下，被氧化形成水溶性藍色產物，在370nm和650nm有吸收峰。進行動力學實驗時，可直接檢測650 nm的吸光度。由于藍色會不斷加深，推薦及時加入終止液，加入酸性終止液后溶液變成穩定的黃色，檢測波長為450 nm，吸光度值可較不終止增加數倍且保持穩定。
2)該底物對微量的HRP酶敏感，在使用過程中應避免污染，切忌將槍頭直接插入大瓶中取液。一旦未使用的顯色液變藍了，說明試劑遭到污染，需停止使用。
3)操作過程中避免陽光的直射，分裝的容器建議用塑料容器，避免使用金屬容器以及細菌和氧化還原劑污染的容器。
4)大量分裝時最好使用稱重的方法或蠕動泵。
5)過高濃度的HRP會導致TMB呈現綠色或紅色，或終止后出現沉淀，應該減少抗體和標記物的用量或縮短孵育時間。
6)本品的靈敏度和信號水平可能優于客戶目前正在使用的顯色液，為了減少陰陽性的誤判，需調整陰陽性的判斷標準以避免錯判。
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