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檢測認證人脈交流通訊錄

單組分ELISA底物顯色液

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    • 1.名稱:TMB底物液,單組份底物液,ELISA 底物顯色液。 2. 產品描述: 用于HRP標記的ELISA;單一組分,穩定,使用方便,靈敏度高。主要成分是3,3’,5,5’–四甲基聯苯胺[3,3’,5,5’- tetramethylbenzidine(TMB)],是辣根過氧化物酶(HRP)的底物,在辣根過氧化物酶的作用下,發生氧化劑反應生成藍色產物。顏色的強弱與HRP的活性呈正比,從而可以用于基于HRP標記物的檢測。 規格: 10mL, 1000mL, 5000mL 3.保存及運輸: 常溫運輸(勿超過30℃),2-8℃儲存12個月。 4.使用方法: 根據計劃使用的數量,將該次需要的TMB顯色液從大瓶轉移的干凈的避光小瓶中。后續從小瓶中取用 1)加液:加完HRP結合物并溫育一定時間后,洗板3-5次,每孔加TMB顯色液100μL - 200μL。 2)根據個人實驗需要,在室溫(15-25℃)或37°C下溫育10-30分鐘。 3)終止:加50微升的2M鹽酸或硫酸溶液終止反應,孔中反應液由藍色變為黃色。 4)讀數:終止反應后30分鐘內在450nm處讀數。 如果出現高的反應背景或沉淀,表明TMB底物反應過于強烈。為了避免產生沉淀,可在終止后馬上讀數;或者進一步稀釋一抗和/或HRP結合物 5.注意事項: 1)適用于HRP標記的ELISA實驗,該底物中含TMB和過氧化氫,在HRP的作用下,被氧化形成水溶性藍色產物,在370nm和650nm有吸收峰。進行動力學實驗時,可直接檢測650 nm的吸光度。由于藍色會不斷加深,推薦及時加入終止液,加入酸性終止液后溶液變成穩定的黃色,檢測波長為450 nm,吸光度值可較不終止增加數倍且保持穩定。 2)該底物對微量的HRP酶敏感,在使用過程中應避免污染,切忌將槍頭直接插入大瓶中取液。一旦未使用的顯色液變藍了,說明試劑遭到污染,需停止使用。 3)操作過程中避免陽光的直射,分裝的容器建議用塑料容器,避免使用金屬容器以及細菌和氧化還原劑污染的容器。 4)大量分裝時最好使用稱重的方法或蠕動泵。 5)過高濃度的HRP會導致TMB呈現綠色或紅色,或終止后出現沉淀,應該減少抗體和標記物的用量或縮短孵育時間。 6)本品的靈敏度和信號水平可能優于客戶目前正在使用的顯色液,為了減少陰陽性的誤判,需調整陰陽性的判斷標準以避免錯判。
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    于小姐

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